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產(chǎn)品簡介：
FIREFLYGLO螢光素酶報告基因檢測系統(tǒng)是一種輝光型定量檢測試劑盒，具有高靈敏度和發(fā)光信號穩(wěn)定的特點，可以滿足高通量檢測螢光素酶在哺乳動物細胞中的表達。相對于美侖閃光型Firefly Luciferase Reporter Assay Kit（MA0517），本品FIREFLYGLO Luciferase Reporter Assay Kit（MA0519）具有以下優(yōu)點：采用了一種全新的螢光素酶檢測底物，提高了發(fā)光信號的穩(wěn)定性，近乎2小時的信號半衰期為實驗設計提供了更大的靈活性；采用加樣-混勻-檢測的操作方法，無需依賴自動進樣器，并且無需棄培養(yǎng)液、離心等步驟，簡化了實驗流程；本試劑盒組分做了大量優(yōu)化，與傳統(tǒng)閃光型產(chǎn)品相比，無明顯刺激性氣味。FIREFLYGLO螢光素酶報告基因檢測試劑盒可用于多種常用細胞培養(yǎng)液：RPMI 1640、DMEM 、MEM-α、F12、DMEM/F12等，其半衰期均為2小時左右（22℃），滿足絕大多數(shù)高通量實驗需求。

使用說明：

1.自備材料
  PBS；多道排槍；白色不透光細胞培養(yǎng)板；化學發(fā)光儀或酶標儀。
2.檢測前準備
1）首次使用時將FIREFLYGLO Luciferase Reaction Buffer一次性全部倒入FIREFLYGLO Luciferase Substrate瓶中，充分混勻后，按使用需求進行分裝，建議-70℃長期保存或者短期存放于-20℃不超過一個月，并盡快使用。
2）每次實驗前將分裝后凍存的檢測試劑平衡至室溫。
3.操作方法
1）從細胞培養(yǎng)箱中取出細胞培養(yǎng)板，放置5-15min，恢復至室溫。
注：使用白色不透光的細胞培養(yǎng)板，減少孔間的信號干擾。
2）加入檢測溶液
使用多道排槍向每個細胞孔中加入平衡至室溫的含有底物的FIREFLYGLO Luciferase Reaction Buffer，加樣體積與細胞培養(yǎng)液體積相同。例如，96孔板通常加入80-100ul培養(yǎng)液，相應加入80ul-100ul檢測溶液；384孔板通常加入20-30ul培養(yǎng)液，相應加入20-30ul檢測溶液。
3）振蕩混勻
為了使得細胞裂解充分，建議將細胞培養(yǎng)板放在振蕩混勻儀或附帶振板功能的儀器上，室溫條件下，采用中高速振板5-10min。
注：建議振板混勻時間為5-10min，可根據(jù)細胞量進行適當調(diào)整，確保細胞充分裂解，得到穩(wěn)定的發(fā)光檢測結(jié)果。
4）檢測
振板混勻后于化學發(fā)光儀或酶標儀中檢測Firefly Luciferase報告基因活性。
注：為得到最佳檢測結(jié)果，請在加入檢測試劑后2小時內(nèi)完成檢測。

注意事項：
1、檢測儀器選擇：能夠檢測化學發(fā)光的儀器都適用本試劑盒的檢測，但是針對相同的樣品，不同檢測器本底信號值和測量值均可能不同；且對于同一樣本檢測，不同儀器的數(shù)值不可橫向比較。為防止孔間干擾，推薦使用不透明白色細胞培養(yǎng)板。
2、由于發(fā)光信號會受到檢測環(huán)境如培養(yǎng)基組分、溫度等影響，所以應確保同組內(nèi)不同樣本檢測條件一致。
3、酶促反應對溫度較為敏感，加樣檢測前務必將檢測試劑以及細胞培養(yǎng)板平衡至室溫。
4、為保證螢光素酶檢測試劑穩(wěn)定性，適量分裝后建議-70℃長期避光保存或者短期存放于-20℃不超過一個月，并盡快使用，盡量避免多次反復凍融。
5、如需同時檢測多個細胞培養(yǎng)板，請盡量確保每個細胞板加入檢測溶液后孵育時間一致，再進行數(shù)據(jù)讀取，以此獲得最佳的檢測結(jié)果。

保存條件：

全新試劑盒-20℃保存，一年有效；
溶解分裝后的FIREFLYGLO Luciferase Substrate于-70℃避光保存一年，或-20℃短期保存不超過一個月。

運輸條件：-10℃干冰運輸。

數(shù)據(jù)展示

圖1. FIREFLYGLO發(fā)光體系在光強、穩(wěn)定性以及線性效果對比P進口品牌。(A) 螢光素酶濃度-光強-時間標曲三維圖。在一定濃度范圍內(nèi)，標準曲線統(tǒng)計顯示為一個截面，說明meilunbio的FIREFLYGLO發(fā)光體系在2h以內(nèi)任一時刻的線性良好。(B) meilunbio的FIREFLYGLO螢光素酶報告基因檢測試劑盒對比P 進口公司最新版本，在絕對光強和穩(wěn)定性方面非常接近。(C) 單一時刻光強-Firefly螢光素酶濃度標曲線性良好（R2=0.9994）。

 
圖2. FIREFLYGLO發(fā)光體系在不同培養(yǎng)基發(fā)光及半衰期驗證。美侖FIREFLYGLO發(fā)光體系在常用培養(yǎng)基如：DMEM、RPMI1640、DMEM/F12、MEMα、F12等都可以正常發(fā)光；螢光半衰期在100-120min 左右，與P進口品牌官方公布的數(shù)據(jù)相當（此處未完全展示，可參考P公司官方網(wǎng)頁）。

 
圖3. 酚紅濃度-FIREFLYGLO螢光穩(wěn)定性驗證。配制含有濃度梯度的PBS溶液，各自加入等量的螢火蟲螢光素酶并驗證FIREFLYGLO 的發(fā)光穩(wěn)定性。由圖可知，meilunbio? FIREFLYGLO 對比P進口品牌具有更好的酚紅耐受能力。

圖4. (A)細胞濃度梯度光強穩(wěn)定性和(B)細胞濃度-光強標曲示例。在細胞培養(yǎng)基環(huán)境中，原位追蹤檢測Firefly Luciferase發(fā)光情況。由圖可知，螢光穩(wěn)定性和絕對光強與P進口品牌差異不大；而且，單一時刻光強-細胞數(shù)標曲線性良好（R2=0.9993）。

 

 
圖5. 293T細胞中TNFα 濃度梯度誘導NF-κB通路檢測效果美侖對比P進口品牌。(A) 歸一化處理后，由圖可知TNFα濃度梯度在2h以內(nèi)各個時刻均保持著相對一致的誘導關系；并且隨著時間進行，這種誘導關系并無明顯變化。(B) 單一時刻TNFα 濃度梯度誘導NF-κB通路效果美侖對比P進口品牌，結(jié)果無顯著性差異。

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